Одной из наиболее актуальных проблем контроля загрязненности лекарственных средств является контроль пирогенов. В настоящее время такой контроль проводится с помощью испытания на бактериальные эндотоксины, которое регламентировано общей статьей Государственной Фармакопеи Украины 2.6.14. «Бактериальные эндотоксины». В отличие от теста на пирогены на кроликах, испытания на бактериальные эндотоксины намного более чувствительны, надежны и могут давать количественную оценку. Это направление фармакопейного анализа в Украине было разработано и внедрено специалистами группы биологических методов анализа Лаборатории фармакопейного анализа (ЛФА) ГП «Фармакопейный центр» под руководством Меркуловой Юлии Вадимовны (ведущий научный сотрудник, к. б. н.), которая сейчас является членом экспертной группы Европейской Фармакопеи. Данный метод полностью соответствует требованиям общей статьи Европейской Фармакопеи, с которой гармонизирована ГФУ.

Для выполнения количественного анализа бактериальных эндотоксинов лаборатория оборудована современными приборами: прибор для автоматического определения бактериальных эндотоксинов турбидиметрическими методами LAL 5000 («Associates of Cape Cod, Inc.», США), микропланшетный ридер ELx808 («BioTek Instruments Inc.» США) на базе спектрофотометра HP 8453 UV-VIS («Hewlett Packard», США).

Кроме того, на базе лаборатории выполняется количественное определение бактериальных эндотоксинов с помощью хромогенного кинетического метода и хромогенного метода конечной точки.

Хромогенный метод относится к инструментальным спектрофотометрическим методам количественного определения бактериальных эндотоксинов. Главной отличительной особенностью хромогенного метода от турбидиметрических является использование специфического лизата, в котором коагулоген — белок, который может сворачиваться, — полностью или частично замещен на искусственный хромогенный пептид.

Принцип хромогенного кинетического метода основан на измерении времени реакции, необходимого для развития определенной интенсивности окрашивания после освобождения красителя благодаря лизису хромогенного пептида в присутствии эндотоксинов. Концентрация бактериальных эндотоксинов в растворе определяется по логарифмам времени реакции с помощью калибровочного графика. Чем выше концентрация эндотоксина, тем быстрее протекает биохимическая реакция, и тем меньше требуется времени для того, чтобы оптическая плотность достигла предельного значения. Измерения проводятся с помощью спектрофотометра при длине волны 405 нм.

Неоспоримыми преимуществами хромогенного кинетического метода являются:

— высокая чувствительность к эндотоксинам;

— широкий стандартный диапазон измеряемых концентраций эндотоксинов;

— автоматизация процедуры проведения анализа и обработки результатов;

— возможность одновременного тестирования большого количества образцов (96 ячеек);

— минимальное время подготовки испытуемых образцов для микропланшетов, что значительно увеличивает надежность и точность результата испытания.

Программное обеспечение к прибору BioTek ELx808:

  • гарантирует безопасность доступа;
  • обеспечивает возможность аудита;
  • предусматривает возможность архивирования данных;
  • соответствует 21 CFR Part 11;
  • облегчает валидацию методики анализа многокомпонентных образцов благодаря применению синтетического субстрата;
  • позволяет анализировать мутные и вязкие образцы.

 

ЛФА ГП «Фармакопейный центр», в частности, группа биологических методов анализа, прошла аттестацию Государственной службой Украины по лекарственным средствам, а также метрологическую проверку.

По поводу проведения испытания на бактериальные эндотоксины обращайтесь в ЛФА по тел. +38 (057) 315-13-52; +38 (057) 719-06-06 (регистратура ЛФА).